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三名可玩角色，分别是尼禄、但丁、以及神秘的新登场角色V。每位角色都会采取截然不同的战斗风格，与城市中的恶魔对抗。
尼禄
年轻的恶魔猎人；
于移动式万能事务所「Devil May Cry」以击退恶魔维生的青年。虽因某事件而失去了「恶魔的右臂【DEVIL BRINGER】」，但在Nico的协力下获得新的「兵装」，对抗开始侵略的恶魔群。
但丁
传奇的恶魔猎人；
万能事务所「Devil May Cry」的主人，拥有传说级高强实力的恶魔猎人。是由身为魔族却拯救了人界的英雄Sparda和人类女性Eva生下的半魔人。过去曾多次越过难关，击退大量恶魔的侵略攻势。是个不论身处任何困境都保持从容不迫的笑容的硬汉。由于接受了某客户的委托，再次投身对抗恶魔侵略的行列。
v
差遣三头魔兽的谜之男子；维吉尔用阎魔刀分离出来的人性部分。
随身携带手杖和诗集，身上纹着极具特征的纹身的瘦弱男子。于Red Grave市的骚动扩大之前，通过情报贩子Morrison，委托Dante讨伐某魔物。本人基本上没有任何战斗力，战斗时会命令手下的三头魔兽攻击。使魔为什么要协助他，而他又为何要讨伐魔王，仍然是个谜。
翠西
美丽的金发恶魔；
拥有酷似Dante母亲Eva的美貌的恶魔。过去曾与Dante敌对，但在被Dante救回一命后变成拍档般的关系。性格飘忽，与Dante保持不即不离的关系。
蕾蒂
操作高威力重武器的恶魔猎人
过去透过某事件结识了但丁，迂回曲折之下成为能够一起共斗的猎人伙伴。会把不划算的工作推给别人再收取中介费，在工作上有严格的一面。
妮可
武器制作的艺术家；
与Nero一同行动的自称「武器艺术家」。祖母【枪匠】Nell Goldstein为一流武器职人。为独臂的Nero打造了「DEVIL BREAKER」。
维吉尔
但丁的孪生兄弟；
传奇魔剑士斯巴达的长子，因为幼年时母亲被恶魔杀害而自己却无能为力，因此渴望获得力量。是本作的最终BOSS。
城市中央一棵巨树冲天而起，市民们纷纷聚来围观，惊诧不已。
“情报商”莫里森望着巨树暗自祈祷：“我们认识这么久……这样的大麻烦还是第一次。这次你也要好好挺过去啊，但丁。”
这边但丁的确遇到了大麻烦，面对空前强大的恶魔，连这个久经沙场的传奇恶魔猎人都束手无策。
此时尼禄也赶来援助但丁。
神秘人V告诉尼禄，千万不要低估这个恶魔，就是它夺走了尼禄的右臂，并从中获得了超凡的力量。
武器
名称 介绍
卡琳娜·安Ⅱ 但丁的武器，以蕾蒂的爱枪卡琳娜·安为原型打造的大型火箭炮，由武器锻造师妮可打造。
刻耳柏洛斯 但丁的武器，但丁打败刻耳柏洛斯王 获得，除冰属性三节棍外，此武器还包含了炎属性长棍和雷属性七节鞭一共三种不同的模式。
但丁 五代中但丁的魔具，以但丁自己的名字命名，真正属于“传奇的恶魔猎人”自己的大剑。剑格护手处有恶魔指爪形装饰，注入魔力时剑身会张开并释放红色的光。除了作为大剑以外，似乎还有着与维吉尔的幻影剑同样由魔力生成的红色剑刃辅助但丁进行攻击的能力。
巴洛克 五代中但丁持有的魔具，由但丁在5代前接受委托重回Dumary岛上击败的同名恶魔变化而成，蕴含炎狱之王力量的炎属性恶魔拳套，能够自由切换拳模式和踢模式。
重骑兵 五代中但丁获得的魔具，由魔界金属吸附在普通摩托车上并与之结合而形成的重型武器，同时依旧保留并大幅强化了摩托车本身的作用。能够从手柄处分开成两把巨大的圆锯对敌人进行攻击
浮士德之帽 五代中但丁获得的魔具，由四代中的恶魔浮士德变化而成、牛仔帽和围巾状的恶魔兵器。能够通过魔力构成的围巾像机枪一样射出魔力子弹，帽子本身也可以作为回旋镖式的武器扔出。以红魂作为供能来源，被击杀的敌人会掉落更多红魂。
道具
《鬼泣5》中总共有70个收集品，其中包含32个蓝魔魂石碎片、8个紫魔魂石碎片、6个蓝魔魂石、5个紫魔魂石、12个隐藏关卡和7个武器。其中蓝魔魂石可以提升体力槽上限，紫魔魂石可以提升魔人槽上限。
《鬼泣5》改变最大的莫过于地图场景的构建。在前半部分城市场景中，玩家将从跨海大桥开始，途径图书馆、巷道、后街、地下铁、废墟、墓穴等等场景，而后期进入邪恶之树中，藤蔓、触手、鲜血这些元素充斥，可以说，地图场景的丰富度与此前的作品不可同日而语 。
解锁系统
《鬼泣5》延续了系列一如既往优秀的配方。每一次解锁新招式、新能力都会为你打开一扇通往新世界的大门。各个可解锁的招式，则会随着流程进度的推进分批出现，始终让你保持着新鲜感。
战斗系统
尼禄沿袭了最经典的枪、剑结合战斗风格，本作最大的改进在于“机械臂”。不同类型的机械臂在战斗中能够发挥不同效果。但丁的战斗风格同样继承了前作基本设定：可灵活切换的四种形态配合各自独特的招式所形成的风格千变万化。V的战斗方式非常独特，以至于即便是系列老手也需要费不少时间进行适应。
《鬼泣5》不但是系列的集大成者，而且在战斗、叙事、关卡节奏、重复游玩等方面均出现了长足进步。它是迄今为止最好的动作游戏之一，在《猎天使魔女3》问世之前，很难想象会有其他动作游戏能够与之相提并论（《游民星空》评）
《鬼泣5》在玩法内核上依然延续了系列一直以来的设计，当初或许有观点认为它缺少变化，但现在看来，一，它做了变化；二，它没做变化的，表现得更好。当CAPCOM把这传统的ACT玩法用最新技术去呈现，我们就会发现，硬核ACT的玩法经得起时间的考验，它在这个时代依然熠熠生辉（《VGTime》评）
